РЕЗУЛЬТАТИВНОСТЬ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ КЛЕТОК ГОНАД КУР IN VIVO В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТАДИИ ВВЕДЕНИЯ ЛЕНТИВИРУСНЫХ ВЕКТОРОВ

Л.А. ВОЛКОВА, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник (e-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.)
Э.Р. МЕННИБАЕВА, младший научный сотрудник
Е.К. ТОМГОРОВА, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
А.Н. ВЕТОХ, младший научный сотрудник
Н.А. ВОЛКОВА, доктор биологических наук, руководитель лаборатории
Н.А. ЗИНОВЬЕВА, доктор биологических наук, директор
Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства им. академика Л.К. Эрнста, пос. Дубровицы, 60, Подольский р-н, Московская обл., 142132, Российская Федерация

Резюме. Генетическая модификация сельскохозяйственной птицы с использованием лентивирусных векторов – один из результативных методов получения трансгенных особей с заданными свойствами. Ввиду физиологических особенностей птицы введение генных конструкций в клетки-мишени возможно только на стадии многоклеточного эмбриона, что обусловливает получение трансгенных особей-мозаиков. Цель исследований – определение оптимального периода введения лентивирусных векторов для трансформации клеток гонад кур in vivo. Работу проводили на базе вивария ВИЖ им. Л.К. Эрнста в 2016 г. Трансгенная птица была получена на основе кросса Шейвер Браун (n=40) с использованием лентивирусного вектора pWCAG, содержащего репортерный ген eGFP (зелёный флюоресцирующий белок), под контролем конститутивного промотора CAG. Вирусный препарат вводили в эмбрионы кур на 24 и 60 ч инкубации. Наличие экспрессии eGFP в органах и тканях трансгенных особей в зависимости от метода введения генной конструкции определяли методами иммуногистохимии и флуоресцентной микроскопии. Высокий процент трансформации органов наблюдали при введении лентивирусного вектора в эмбрионы кур на 24 ч инкубации – 51,2±6,3 %, что на 6-8 % выше величины аналогичного показателя при введении вирусного препарата на 60 ч инкубации. Вместе с тем, процент трансформации репродуктивных органов был в 1,9 раз выше при введении лентивирусного вектора в дорсальную аорту на 60 ч инкубации, что, возможно, связано с миграцией в этот возрастной период из крови в гонады примордиальных зародышевых клеток, служащих предшественниками половых клеток. Оптимальный срок введения лентивирусных векторов в эмбрионы кур in vivo с целью получения трансгенного потомства – 60 ч инкубации эмбрионов.

Ключевые слова: трансгенез, куры, лентивирусные вектора, экспрессия, рекомбинантные белки.

Для цитирования: Результативность генетической трансформации клеток гонад кур in vivo в зависимости от стадии введения лентивирусных векторов / Л.А. Волкова, Э.Р. Меннибаева, Е.К. Томгорова, А.Н. Ветох, Н.А. Волкова, Н.А. Зиновьева // Достижения науки и техники АПК. 2016. Т. 30. №11. С. 107-109.