К.В. БЕСПОМЕСТНЫХ, кандидат технических наук, заведующий лабораторией
Кемеровский государственный сельскохозяйственный институт
E-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.
Резюме. В работе представлены результаты исследований по созданию ПЦР-тест-системы для индикации и идентификации молочнокислых бактерий заквасок, применяемых в производстве кисломолочных продуктов. С целью выявления консервативных участков для закладки родоспецифичных и видоспецифичных праймеров были проанализированы нуклеотидные последовательности ДНК, кодирующей синтез 16S рРНК бактерий рода Lactobacillus, представленных в GenBank. Сконструированы новые родоспецифичные и видоспецифичные праймеры для идентификации бактерий рода Lactobacillus, имеющих значительные отличия от молочнокислых бактерий других родов и видов. Их теоретическая специфичность подтверждена экспериментально на бактериальных заквасках, концентратах и кисломолочных продуктах. Практически созданные праймеры обладают наибольшей степенью гомологии к участкам нуклеотидной последовательности ДНК 16S рРНК микроорганизмов L. delbrieckii subsp. bulgaricus и обладают высокой специфичностью. Они позволяют выявить различие определенного вида микроорганизма по отношению к другим бактериям и определить их количественное содержание в продукте. Оптимальные параметры амплификации гена 16S рРНК молочнокислых бактерий (температура, время инкубации, количество циклов): 95ºС – 200 с – 1 цикл, [62ºС – 50 с, 95ºС – 20 с] – 25 циклов, 72ºС – 120 с – 1 цикл. Результаты идентификации видов L. bulgaricus и других лактобактерий с помощью полимеразной цепной реакции сопоставимы с полученными с использованием классического биохимического метода на основе сахаролитической активности различных видов лактобацилл. Исследования, проведенные на широком спектре кисломолочных продуктов, экспериментально подтвердили более высокую специфичность и чувствительность ПЦР-тест-системы для идентификации молочнокислых бактерий, входящих в состав бактериальных заквасок.
Ключевые слова: полимеразная цепная реакция, праймеры, бактерии рода Lactobacillus, кисломолочная продукция, контроль качества.