А. Б. РОМАНОВА, младший научный сотрудник
Е. В. КОРНИЕНКО, научный сотрудник
С. Н. КОВАЛЬЧУК, кандидат биологических наук, врио директора (е-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.)
Центр экспериментальной эмбриологии и репродуктивных биотехнологий, ул. Костякова, 12, стр. 4, Москва, 127422, Российская Федерация
Резюме. Оценивали эффективность доставки экзогенной ДНК в полученные in vitro зиготы крупного рогатого скота с использованием липосом путем микроинъекции комплексов плазмида-липосомы в цитоплазму зигот и путем липофекции лишенных блестящей оболочки зигот крупного рогатого скота. Микроинъекцию проводили через 18…22 ч после начала оплодотворения, концентрация кольцевой плазмиды pEGFP-N1 в инъекционном растворе составляла 18, 26, 250 мкг/мл, линеаризованной – 13 мкг/мл, количество эмбрионов – 25, 25, 12 и 25 соответственно. Увеличение концентрации плазмиды существенно не повлияло на динамику развития эмбрионов in vitro и на долю эмбрионов, экспрессировавших целевой ген EGFP. У всех эмбрионов с флуоресцентным сигналом отмечен мозаичный характер экспрессии целевого гена. Флуоресцентный сигнал наблюдали только в 1 бластоцисте, полученной при микроинъекции линеаризованной плазмиды в комплексе с липосомами. Эффективность метода оказалась низкой (4,0…8,3 %), за исключением группы, где концентрация плазмиды составляла 18 мкг/мл (20,0 %). Впервые показана эффективность метода трансфекции лишенных блестящей оболочки зигот путем липофекции в применении к крупному рогатому скоту. Время начала трансфекции кольцевой плазмидой – 18, 22, 24, 27 ч от начала оплодотворения, количество эмбрионов – соответственно 12, 15, 35, 33; линеаризованной – 18 и 27 ч, 12 и 13 эмбрионов соответственно. Больше всего эмбрионов, экспрессировавших ген TurboGFP (51,5 %), наблюдали при трансфекции через 27 ч после начала оплодотворения при использовании кольцевой плазмиды. При проведении липофекции с использованием линеаризованной плазмиды изменение времени начала трансфекции с 18 до 27 ч существенно не влияло на величину этого показателя (33,3 и 30,8 % соответственно). Метод липофекции представляется преспективным для неинвазивной трансфекции лишенных блестящей оболочки зигот крупного рогатого скота.
Ключевые слова: крупный рогатый скот, зигота, трансгеноз, липосомы, микроинъекция.
Для цитирования: Романова А. Б., Корниенко Е. В., Ковальчук С. Н. Эффективность методов доставки экзогенной ДНК в полученные in vitro зиготы крупного рогатого скота с использованием липосом // Достижения науки и техники АПК. 2018. Т. 32. № 10. С. 69–73. DOI: 10.24411/0235-2451-2018-11016.