С.Г. ВОЛОГИН, кандидат биологических наук, зав. лабораторией
И.В. ПИКАЛОВА, научный сотрудник
З. СТАШЕВСКИ, кандидат биологических наук, зав. отделом
М.Ш. ТАГИРОВ, доктор сельскохозяйственных наук, директор
Татарский НИИ сельского хозяйства, Оренбургский тракт, 48, Казань, 420059, Россия
E-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.
Резюме. Исследование проводили с целью поиска оптимального способа подготовки биоматериала, включающего применение буферных и антисептических соединений и повышающего достоверность диагностического выявления Y-вируса картофеля (YВК) методом иммуноферментного анализа (ИФА). Применение 0,1 М Tris-HCl буфера (ТБ) оказалось достаточным для поддержания кислотно-щелочного равновесия в биоматериале картофеля. Дополнительное введение 0,01 М азида натрия совместно с 0,1 М ТБ приводило к снижению величины детектируемого колориметрического сигнала в ходе ИФА при исследовании листовых проб на 59,6% (p < 0,01), а этиолированных клубневых ростков – на 7,6% (p>0,05). Выдвинуто предположение о том, что преаналитический эффект азида натрия связан с оксидативным повреждением белка оболочки YВК. При диагностическом изучении листовых и клубневых проб применение 0,01 мертиолята натрия (МН) в комплексе с 0,1 М ТБ привело к статистически значимому повышению уровня детектируемого сигнала соответственно на 38,3 и 62,9% (p < 0,01). Сделано предположение о том, что выявленный эффект связан с биохимической трансформацией МН в растительном материале, приводившей к образованию тиосалициловой кислоты (ТСК). Это соединение имеет в своем составе тиогруппу, которая может блокировать негативное воздействие веществ полифенольного ряда. Внесение 0,01 М ТСК на стадии пробоподготовки также сопровождалось повышением величины детектируемого сигнала (p < 0,01). Положительный эффект ТСК оказался сопоставимым с действием других соединений с тиогруппой – тиогликолевой кислоты и 2-меркаптоэтанола, а также веществ, обладающих антиоксидантными (сульфит натрия, аскорбиновая кислота), хелатирующими (ЭДТА) и фенолсвязывающими (поливинилпирролидон) свойствами. Применение МН и ТСК обеспечивало надежную иммунодиагностику YВК на протяжении 7 сут. преаналитического хранения при температуре от +2 до +8 ºС. Для повышения достоверности результатов диагностики вирусов картофеля рекомендовано использование 0,1 М ТБ в комплексе с 0,01 М МН или 0,01 М ТСК на стадии подготовки биоматериала.
Ключевые слова: диагностика, картофель, пробоподготовка, вирус картофеля, иммуноферментный анализ, азид натрия, мертиолят натрия, тиосалициловая кислота.
Для цитирования: Подготовка биоматериала для диагностики вирусов картофеля: 2. Влияние стабилизирующих соединений // С.Г. Вологин, И.В. Пикалова, З. Сташевски, М.Ш. Тагиров // Достижения науки и техники АПК. 2015. Т.29. №5. С. 47-50.