РЕЗУЛЬТАТИВНОСТЬ РАЗВИТИЯ ЭМБРИОНОВ КУР ПРИ ВВЕДЕНИИ ЛЕНТИВИРУСНЫХ ВЕКТОРОВ IN VIVO

А.Н. ВЕТОХ, младший научный сотрудник (e-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.)
Н.А. ВОЛКОВА, доктор биологических наук, руководитель лаборатории
Э.Р. МЕННИБАЕВА, младший научный сотрудник
Е.К. ТОМГОРОВА, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
И.К. ФОМИН, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
Д.В. БЕЛОГЛАЗОВ, кандидат биологических наук, научный сотрудник
Н.А. ЗИНОВЬЕВА, доктор биологических наук, академик РАН, директор
Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства им. Л.К. Эрнста, пос. Дубровицы, 60, Подольский р-н, Московская обл., 142132, Российская Федерация

Резюме. Векторные системы, полученные на основе таких интегративных вирусов, как лентивирусы и ретровирусы – эффективный инструмент для введения и выражения генов. В этой связи представляет интерес подбор регуляторных последовательностей в составе генных конструкций, обеспечивающих высокую эффективность трансгенеза. Цель исследований – изучение влияния регуляторных последовательностей в составе лентивирусных векторов на развитие эмбрионов кур и результативность получения птицы. Исследования проводили на базе вивария ВИЖ им. Л.К. Эрнста в 2015-2016 гг. на эмбрионах кур кросса Шейвер Браун (n=519). Использовали лентивирусный вектор pWpxl, на основе которого получили 8 лентивирусных векторов, содержащих репортерный ген eGFP (зелёный флюоресцирующий белок) под контролем конститутивных (векторы pWCAG и pWRSV) и тканеспецифичных (векторы pW2.8, pW1.2, pWС1, pWС2, pWМ1 и pWМ2) регуляторных элементов. Вирусный препарат вводили в эмбрионы кур на 24 и 60 ч инкубации. Изучали динамику развития эмбрионов и результативность получения птицы в зависимости от способа введения лентивирусных векторов и используемых в их составе регуляторных последовательностей. Экспрессию рекомбинантного белка в эмбриональных клетках определяли на 6 день инкубации с использованием проточной цитофлуориметрии. Относительно высокая доля клеток эмбриона, экспрессирующих рекомбинантных белок eGFP, была установлена при трансфекции эмбриональных клеток на 24 ч инкубации – 34,3 %, что на 4,3 % выше, чем при введении лентивирусных векторов в дорсальную аорту эмбрионов на 60 ч инкубации. Наименьшее влияние на эмбриогенез выявлено при использовании лентивирусных векторов с регуляторными элементами, обеспечивающими тканеспецифическую экспрессию рекомбинантных генов. При использовании лентивирусных векторов с конститутивной экспрессией структурного гена доля развившихся эмбрионов была в среднем на 6,5 % ниже.

Ключевые слова: трансгенез, куры, лентивирусные вектора, экспрессия, рекомбинантные белки.

Для цитирования: Результативность развития эмбрионов кур при введении лентивирусных векторов in vivo / А.Н. Ветох, Н.А. Волкова, Э.Р. Меннибаева, Е.К. Томгорова, И.К. Фомин, Д.В. Белоглазов, Н.А. Зиновьева // Достижения науки и техники АПК. 2016. Т. 30. № 12. С. 83-85.